PHB2蛋白具有抑制細胞增殖的作用。為初步探究某動物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱phb2基因），大小為0.9kb（1kb=1000堿基對），利用大腸桿菌表達該蛋白。回答下列問題：
| 名稱 | 識別序列及切割位點 | 名稱 | 識別序列及切割位點 |
| HindⅢ | A↓AGCTT TTCGA↑A |
EcoRⅠ | G↓AATTC CTTAA↑G |
| PstⅡ | CAG↓CTG GTC↑GAC |
PstⅠ | CTGC↓AG GA↑CGTC |
| KpnⅠ | G↓GTACC CCATG↑G |
BamHⅠ | G↓GATCC CCTAG↑G |
（1）為獲取phb2基因，提取該動物肝臟組織的總RNA，再經
逆轉錄
逆轉錄
過程得到cDNA，將其作為PCR反應的模板，并設計一對特異性引物來擴增目的基因。（2）圖1為所用載體圖譜示意圖，圖中限制酶的識別序列及切割位點見表。為使phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識別序列）與載體正確連接，在擴增的phb2基因兩端分別引入
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 PstⅡ
PstⅡ
兩種不同限制酶的識別序列，為此需要將兩種酶的識別序列分別設計在兩種引物的 5’
5’
端（填5'或3'）。經過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進行連接時，可選用 T4
T4
（填“E.coli”或“T4”）DNA連接酶。（3）轉化前需用
Ca2+或CaCl2
Ca2+或CaCl2
處理大腸桿菌細胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，以提高轉化效率。（4）將轉化后的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，隨機挑取單菌落（分別編號為1、2、3、4）培養(yǎng)并提取質粒，用（2）中選用的兩種限制酶進行酶切，酶切產物經電泳分離，結果如圖2，
3
3
號菌落的質粒很可能是含目的基因的重組質粒。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉錄；EcoRⅠ；PstⅡ；5’；T4；Ca2+或CaCl2；3
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：15引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6