酸性α淀粉酶具有良好的酸穩(wěn)定性，在高麥芽糖漿的生產(chǎn)、工業(yè)廢液的處理等多個領域有很好的應用。以黑曲霉基因組DNA為模板，通過PCR擴增出酸性a淀粉酶的基因（asAA），將asAA插入質(zhì)粒（pPIC9K），獲得的重組質(zhì)粒（pPIC9K-asAA）轉(zhuǎn)化畢赤酵母，在畢赤酵母相關基因及重組質(zhì)粒的調(diào)控下，酸性α淀粉酶大量表達并分泌到胞外。EcoRⅠ、NotⅠ和SalⅠ產(chǎn)生的黏性末端不同。
回答問題。
（1）用PCR技術擴增asAA時，應從候選引物片段P1-P4中選擇 P2、P3P2、P3作為引物：asAA不含質(zhì)粒pPIC9K的相關酶切位點，應在所選引物的5'前增加限制酶 EcoRⅠ和NotⅠEcoRⅠ和NotⅠ的酶切位點，再用 DNA連接DNA連接酶構建重組質(zhì)粒pPIC9K-asAA。
（2）與導入原核細胞相比，導入畢赤酵母后酸性α淀粉酶能大量表達并分泌到胞外的原因是 畢赤酵母是真核生物，含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細胞器可以對蛋白質(zhì)進行加工修飾畢赤酵母是真核生物，含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細胞器可以對蛋白質(zhì)進行加工修飾。
（3）畢赤酵母細胞膜上的蛋白酶會降解表達產(chǎn)物，影響酸性α淀粉酶的產(chǎn)量。研究人員將重組質(zhì)粒（pPIC9K-asAA）和質(zhì)粒（pPIC9K）分別導入蛋白酶缺陷型畢赤酵母，并對其分泌的蛋白質(zhì)產(chǎn)物進行電泳檢測，結(jié)果如圖3。圖示樣本1來自導入 重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒的蛋白酶缺陷型畢赤酵母，58kD條帶的出現(xiàn)表明 asAA在蛋白酶缺陷的畢赤酵母中得以表達，不會被蛋白酶水解asAA在蛋白酶缺陷的畢赤酵母中得以表達，不會被蛋白酶水解。
（4）酸性α淀粉酶具有酸穩(wěn)定性。分析表明，相較于其他淀粉酶它含有更多的酸性氨基酸，該特性的形成與組成其氨基酸的 種類種類有關。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】P2、P3；EcoRⅠ和NotⅠ；DNA連接；畢赤酵母是真核生物，含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細胞器可以對蛋白質(zhì)進行加工修飾；重組質(zhì)粒；asAA在蛋白酶缺陷的畢赤酵母中得以表達，不會被蛋白酶水解；種類
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/17 8:0:9組卷：8引用：2難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7