M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達。現(xiàn)設(shè)計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過特定生物學技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

斷開。
（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，都要用到胰蛋白酶，作用分別是

將組織分散成細胞

將組織分散成細胞

、

使細胞從瓶壁上脫落

使細胞從瓶壁上脫落

。培養(yǎng)過程中，需要定期更換培養(yǎng)液，目的有

清除代謝物（，防止對細胞造成危害）

清除代謝物（，防止對細胞造成危害）

、

給細胞補充營養(yǎng)

給細胞補充營養(yǎng)

。
（3）與胚胎細胞核移植技術(shù)相比，體細胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是

體細胞分化程度高，恢復全能性困難

體細胞分化程度高，恢復全能性困難

。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞，功能上具有

全能性

全能性

。
（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動物：以免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的

單克隆抗體

單克隆抗體

。簡要寫出利用其確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路：

分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質(zhì)，進行抗原——抗體雜交

分別提取動物A和克隆動物A的肝組織蛋白質(zhì)，進行抗原——抗體雜交

。
（5）獲得克隆動物A時，除了轉(zhuǎn)基因技術(shù)，還涉及的生物學技術(shù)有

動物細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植

動物細胞培養(yǎng)、核移植、胚胎移植

。