載體分為克隆載體（用于大量擴增外源DNA的載體）和表達載體（使目的基因既能擴增又能表達出相應(yīng)蛋白的載體），大腸桿菌pUC118質(zhì)粒是常用的克隆載體，具有氨芐青霉素抗性基因和lacZ基因。已知①lacZ基因表達產(chǎn)物在X-gal和IPTG存在下，可以使大腸桿菌菌落呈現(xiàn)藍色；若lacZ基因被破壞，菌落呈現(xiàn)白色。②pUC118質(zhì)粒中僅lacZ基因中具有限制酶A的識別位點。③胰島素基因兩側(cè)分別具有限制酶A和限制酶B的識別位點。圖1是pUC118質(zhì)粒經(jīng)限制酶A切割后的DNA片段；圖2～4是目的基因——人胰島素基因經(jīng)限制酶A和限制酶B的切割后的片段。
（1）克隆載體pUC118質(zhì)粒經(jīng)改造后可作為表達載體，需要增加的表達元件（結(jié)構(gòu)）有 啟動子和終止子啟動子和終止子。
（2）限制酶B識別的核苷酸序列和作用的化學(xué)鍵分別是 CCCGGGCCCGGG和 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（3）科研人員將經(jīng)處理后的胰島素基因與圖1所示pUC118質(zhì)?；旌?，加入DNA連接酶進行連接反應(yīng)。將得到的混合物導(dǎo)入大腸桿菌細胞前，大腸桿菌需用 Ca2+Ca2+處理。
（4）若篩選出目的菌株，則培養(yǎng)基中除營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)添加 氨芐青霉素、X-gal和IPTG氨芐青霉素、X-gal和IPTG。目的菌株在該培養(yǎng)基上的生長特點是 形成白色菌落（或形成菌落，且菌落呈白色）形成白色菌落（或形成菌落，且菌落呈白色）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】啟動子和終止子；CCCGGG；磷酸二酯鍵；Ca2+；氨芐青霉素、X-gal和IPTG；形成白色菌落（或形成菌落，且菌落呈白色）
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：4引用：1難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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