M基因編碼的M蛋白在動(dòng)物A的肝細(xì)胞中特異性表達(dá)?，F(xiàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動(dòng)物A，流程如圖所示。回答下列問題：
（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，將目的基因和質(zhì)?！翱p合”在一起的工具酶是

DNA連接酶

DNA連接酶

。該酶據(jù)來(lái)源可以分為兩類，其中

T₄DNA連接酶

T₄DNA連接酶

既可以“縫合”粘性末端，又可以“縫合”平末端。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入成纖維細(xì)胞常用的方法是

顯微注射技術(shù)

顯微注射技術(shù)

。
（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常需要添加一定量的

抗生素

抗生素

，以防止培養(yǎng)過程中的污染。在無(wú)菌、無(wú)毒等適宜環(huán)境中進(jìn)行動(dòng)物A成纖維細(xì)胞的原代和傳代培養(yǎng)時(shí)，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害

清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害

。
（3）與胚胎細(xì)胞核移植技術(shù)相比，體細(xì)胞核移植技術(shù)的成功率更低，原因是

動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難

動(dòng)物胚胎細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)其全能性相對(duì)容易，而動(dòng)物體細(xì)胞分化程度高，恢復(fù)其全能性十分困難

。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細(xì)胞，在形態(tài)上表現(xiàn)為

細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯

細(xì)胞體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯

（答出兩點(diǎn)即可），功能上具有

發(fā)育的全能性

發(fā)育的全能性

。
（4）鑒定轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：以免疫小鼠的

B

B

淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，篩選融合雜種細(xì)胞，制備M蛋白的單克隆抗體。