心臟移植是挽救終末期心臟病患者生命唯一有效的手段，然而心臟移植過程中會發(fā)生缺血再灌注損傷（IRI），可能導致心臟壞死。研究發(fā)現，IRI通過促進Caspase8等一系列凋亡基因的表達，導致細胞凋亡最終引起器官損傷。根據Caspase8基因合成的小干擾RNA（siRNA）可以使Caspase8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官損傷。圖1是利用豬的心肌細胞開展siRNA作用研究的示意圖，圖2是此研究可能用到的4種限制酶及其切除位點?；卮鹣铝袉栴}：
（1）圖1中步驟②構建重組質粒需要使用多種工具酶。常用的DNA連接酶有E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶。圖2中 EcoRⅠ、PstⅠEcoRⅠ、PstⅠ酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA連接酶連接，圖中 EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcoRVEcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcoRV酶切割后的DNA片段可以用T4DNA連接酶連接。DNA連接酶催化目的基因片段與質粒載體片段之間形成的化學鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。
（2）圖1中步驟③將重組質粒導入豬的心肌細胞最常用的方法是 顯微注射法顯微注射法。siRNA對應DNA序列在心肌細胞中表達產生siRNA的步驟④稱為 轉錄轉錄。siRNA與RISC組裝形成基因沉默復合物，通過抑制基因表達的 翻譯翻譯過程，使Caspase8基因沉默，從而降低IRI引起的細胞凋亡。
（3）研究人員根據Caspase8基因的堿基序列，設計了三種序列分別導入豬的心肌細胞，通過測定靶基因Caspase8的mRNA含量來確定最優(yōu)序列。測定mRNA含量時，需提取心肌細胞的總RNA，經過逆轉錄逆轉錄過程得到cDNA，再進行PCR擴增，測定PCR產物量，結果如圖3所示。據此判斷最優(yōu)序列是 序列2序列2。
（4）選用豬的心肌細胞作受體細胞是因為豬在基因、解剖結構、生理生化和免疫反應等方面與人類極為相似。為了解決心臟移植供體短缺問題，許多科學家正在研究用豬心臟代替人的心臟。你認為將豬心臟移植到人體面臨的最大挑戰(zhàn)是 免疫排斥反應免疫排斥反應。
【答案】EcoRⅠ、PstⅠ；EcoRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcoRV；磷酸二酯鍵；顯微注射法；轉錄；翻譯；逆轉錄；序列2；免疫排斥反應
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/25 8:0:9組卷：41引用：4難度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6