色鹽桿菌DSM22428T是從演海鹽地的堿蓬中分離到的種嗜鹽菌。研究證實，該菌株在高鹽條件下，可通過在細胞內積累滲透保護劑——甘氨酸甜菜堿（其合成與甜菜堿醛脫氫酶密切相關）來抵抗外界的滲透脅迫。在不同濃度梯度的NaCl基本培養(yǎng)基中添加濃度為1 mM的膽堿，接種色鹽桿菌DSM22428T。和對照組相比。在鹽脅迫條件下，外界提供一定濃度的膽堿，可以明顯提高色鹽桿菌DSM22428T的耐鹽能力，說明色鹽桿菌DSM22428T甜菜堿醛脫氫酶具有明顯的調節(jié)滲透壓功能?？蒲腥藛T根據(jù)已獲得的一段甜菜堿醛脫氫酶基因（betB）的堿基序列，設計了一對帶有酶切位點的上、下游引物，先以色鹽桿菌DSM22428T的總DNA為模板擴增獲得betB基因的全序列，經雙酶切（限制酶的識別序列和切割位點如下表）后連接到表達載體質粒pET-15b上，再轉化到大腸桿菌BL21（DE3）內，最終獲得重組大腸桿菌。請回答下列問題：
引物設計如下：
上游引物：5'ATAGGATCCATGAGCGTTTTCGAGACTC 3'
下游引物：5'ATACTCGAGTTAGAACGCGGATTCGAAC 3'

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	XhoⅠ	XbaⅠ
識別序列	5'-G↓GATCC-3'	5'-A↓AGCTT-3'	5'-C↓TCGAG-3'	5'-T↓CTAGA-3'

（1）以色鹽桿菌DSM22428T的總DNA為模板擴增獲得betB基因的全序列。為保證betB基因正確插入到表達載體質粒pET-15b上，可選擇

BamHI

BamHI

和 

Xho I

Xho I

限制酶切割得到該基因，再通過

DNA 連接

DNA 連接

酶形成重組表達載體。
（2）將含有betB基因的表達載體質粒DET 15b導入大腸桿菌采用的方法是

感受態(tài)細胞轉化法

感受態(tài)細胞轉化法

，該表達載體中標記基因的作用是

將含有betB（目的）基因的細胞篩選出來

將含有betB（目的）基因的細胞篩選出來

。
（3）重組大腸桿菌的變異類型屬于

基因重組

基因重組

。重組表達載體質粒pET-15b是否能正確表達甜菜堿醛脫氫酶，可以采用分子水平上的

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

技術進行檢測。
（4）為了進一步驗證異源表達的甜菜堿醛脫氫酶是否具有調節(jié)滲透壓的功能，在不同濃度梯度的NaCl培養(yǎng)基中添加濃度為1mM的膽堿，再接種

重組大腸桿菌

重組大腸桿菌

，用IPTG（誘導劑）誘導表達，結果發(fā)現(xiàn)，

重組大腸桿菌的存活率和生長速度

重組大腸桿菌的存活率和生長速度

 高于帶空質粒的對照組，尤其在高鹽條件下效果更加明顯，可見色鹽桿菌DSM22428TbetB基因的導入顯著提高了重組大腸桿菌的耐鹽性，說明異源表達的甜菜堿醛脫氫酶同樣具有調節(jié)滲透壓的功能。