研究者將釀酒酵母S288c的APAl基因與EGFP（增強型綠色熒光蛋白）基因構成融合基因，并進一步構建表達載體（如圖甲所示）。以該載體為模板，再通過PCR介導的定點突變技術向APAl基因中分別引入突變位點，經(jīng)典的大引物PCR定點誘變技術成為基于PCR技術的定點誘變技術中應用最普遍的方法，操作過程如圖乙所示，其中引物箭頭代表子鏈延伸方向。回答下列問題：
（1）構建表達載體時，應將融合基因放于 啟動子啟動子、終止子終止子等結構之間，以保證目的基因的轉(zhuǎn)錄。為實現(xiàn)質(zhì)粒和融合基因的高效連接，切割質(zhì)粒時選用限制酶XmaⅠ而不選用限制酶SmaⅠ的原因是 SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接。為將融合基因構建在質(zhì)粒上，還需要 BglII、DNA連接酶BglII、DNA連接酶等酶。
（2）利用大引物PCR進行定點誘變需要進行兩輪PCR（PCR1和PCR2）。在PCR1中，至少需要 22個循環(huán)才能獲得相應的大引物模板。在PCR2中？處的引物應選用大引物兩條鏈中的 ②②（填“①”或“②”）鏈的子鏈。
（3）若在熒光顯微鏡下觀察到受體細胞有綠色熒光，則表明 APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物），EGFP基因的作用是 作為標記基因，用于目的基因的檢測和鑒定作為標記基因，用于目的基因的檢測和鑒定。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】啟動子；終止子；SmaI的酶切末端為平末端，無法與融合基因上的黏性末端連接；BglII、DNA連接酶；2；②；APAl基因與EGFP基因已經(jīng)表達（或融合基因形成了蛋白質(zhì)產(chǎn)物）；作為標記基因，用于目的基因的檢測和鑒定
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：27引用：3難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7