多酚氧化酶（PPO）基因的大量表達(dá)是促使果實(shí)褐變的主要原因之一?？蒲腥藛T將獲得的PPO基因反向插入質(zhì)粒中，構(gòu)建PPO基因的反義表達(dá)載體（重組質(zhì)粒），并在農(nóng)桿菌介導(dǎo)下實(shí)現(xiàn)了對鴨梨組培苗的轉(zhuǎn)化，其操作流程如圖所示。回答下列問題：
（1）可利用PCR技術(shù)獲取目的基因，依據(jù)的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，該過程需要根據(jù) 多酚氧化酶（PPO）基因（目的基因）兩端的核苷酸序列多酚氧化酶（PPO）基因（目的基因）兩端的核苷酸序列設(shè)計(jì)特異性引物序列，過程①是 構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體。
（2）應(yīng)選擇 SacⅠ和XbaⅠSacⅠ和XbaⅠ兩種限制酶對質(zhì)粒進(jìn)行切割，使用兩種限制酶切割的優(yōu)點(diǎn)是 防止目的基因和運(yùn)載體的自身環(huán)化及反向連接防止目的基因和運(yùn)載體的自身環(huán)化及反向連接。
（3）PPO基因的反義表達(dá)載體導(dǎo)入到受體細(xì)胞后，表達(dá)出的mRNA與受體細(xì)胞中的多酚氧化酶（PPO）基因的mRNA能夠進(jìn)行 堿基互補(bǔ)配對堿基互補(bǔ)配對，從而 抑制抑制（填“抑制”或“促進(jìn)”）PPS基因的表達(dá)。
（4）過程③表示 再分化再分化，若想要誘導(dǎo)愈傷組織生根，需要的激素條件是 生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值＞1生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值＞1。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA半保留復(fù)制；多酚氧化酶（PPO）基因（目的基因）兩端的核苷酸序列；構(gòu)建基因表達(dá)載體；SacⅠ和XbaⅠ；防止目的基因和運(yùn)載體的自身環(huán)化及反向連接；堿基互補(bǔ)配對；抑制；再分化；生長素用量與細(xì)胞分裂素用量的比值＞1
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/7/19 8:0:9組卷：10引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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