PCR技術于1985年誕生，應用十分廣泛，幾乎包括生物技術的各個方面，例如：分離與擴增目的基因，基因表達的研究，DNA測序以及基因診斷等?；卮鹣铝袉栴}：

（1）PCR技術擴增目的基因的前提是

已知一段目的基因的核苷酸序列

已知一段目的基因的核苷酸序列

，以便根據(jù)此前提合成引物，引物的作用是

使Taq酶能從引物的3'端連接脫氧核苷酸

使Taq酶能從引物的3'端連接脫氧核苷酸

以mRNA為模板進行的特殊PCR技術，過程如圖1，該過程所需要的酶有

逆轉錄酶

逆轉錄酶

和

Taq酶

Taq酶

。
（2）一定濃度范圍內(nèi)，模板濃度與PCR產(chǎn)物的濃度呈正比。在RT-PCR過程中加入Taq Man探針，原理如圖2所示，Taq Man探針序列對應待擴增的目的基因的序列，在其5'端連接一個報告熒光基團（R），在其3'端連接一個淬滅熒光基因（Q），探針完整時，報告熒光基團與淬滅熒光基團位置接近，發(fā)射的熒光被淬滅劑吸收，熒光強度很低。PCR過程中Taq酶從5'端切斷Taq Man探針，釋放熒光基團。根據(jù)熒光強度可對PCR產(chǎn)物進行定量分析，原理是

隨著PCR循環(huán)次數(shù)的增加，釋放的熒光基團也會越多，熒光就會越強

隨著PCR循環(huán)次數(shù)的增加，釋放的熒光基團也會越多，熒光就會越強

。根據(jù)PCR產(chǎn)物的濃度又可以估算

起始模板mRNA

起始模板mRNA

的濃度，以此代表目的基因在特定組織中的表達量。
（3）利用PCR技術，在引物的某個特定位點引入一個或多個不能與目的基因配對的堿基，就可以在目的基因中帶來定點突變，據(jù)此獲得的目的基因再經(jīng)表達、純化獲得蛋白質(zhì)，該過程屬于

蛋白質(zhì)工程

蛋白質(zhì)工程

（填工程技術）的范疇。