基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。如圖為構(gòu)建基因表達(dá)載體所用的質(zhì)粒示意圖?;卮鹣铝袉栴}:
(1)質(zhì)粒是一種 裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細(xì)菌擬核DNA之外、能夠自我復(fù)制的、雙鏈環(huán)狀裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細(xì)菌擬核DNA之外、能夠自我復(fù)制的、雙鏈環(huán)狀(答出兩點)DNA分子。在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外,還有 λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等(答出兩點)。
(2)已知EcoRⅠ的識別和切割位點為G↓AATTC,BamHⅠ的識別和切割位點為G↓GATCC,SmaⅠ的識別和切割位點為CCC↓GGG。這三種限制酶中,切割DNA后能產(chǎn)生黏性末端的是 EcoRⅠ和BamHⅠEcoRⅠ和BamHⅠ。
(3)若使用上述三種限制酶中的兩種切割的目的基因能夠與圖示質(zhì)粒成功構(gòu)建基因表達(dá)載體,則其中的標(biāo)記基因是 氨芐青霉素抗性基因氨芐青霉素抗性基因。與用一種限制酶切割相比,用兩種限制酶同時切割目的基因和質(zhì)粒的優(yōu)點是 能夠避免目的基因和質(zhì)粒酶切后產(chǎn)生的片段發(fā)生自身環(huán)化或任意連接能夠避免目的基因和質(zhì)粒酶切后產(chǎn)生的片段發(fā)生自身環(huán)化或任意連接。
(4)在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中,目的基因與質(zhì)粒在DNA連接酶的作用下通過 磷酸二酯磷酸二酯鍵連接起來。構(gòu)建的基因表達(dá)載體上需要含有啟動子和終止子等,其中終止子的作用是 使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。
【答案】裸露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨立于細(xì)菌擬核DNA之外、能夠自我復(fù)制的、雙鏈環(huán)狀;λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等;EcoRⅠ和BamHⅠ;氨芐青霉素抗性基因;能夠避免目的基因和質(zhì)粒酶切后產(chǎn)生的片段發(fā)生自身環(huán)化或任意連接;磷酸二酯;使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來
【解答】
【點評】
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